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在读博士生的实验记录

已有 6332 次阅读 2013-5-19 13:25 |系统分类:科研笔记

2007年7月29日我踏进了现在所在的发育生物学实验室,开始我的求学生涯。(那时还没有正式开学,开学时间是9月7日,我是被老师要求过来提前学习实验技能的)。今天我依然坐在实验室的学生自习室内,对着电脑,记录下我一路走来的“跌跌撞撞”。

 

07年9月份正式入学,刚开始是做筛选工作。我们课题组从大实验要了一批水稻T-DNA插入突变体库,于是我们几个新生就开始筛库。这份工作很简单,流程就是:水稻种子消毒--配制培养基--点种--7天后,GUS染色--显微镜拍照--统计数据--汇报工作。这份工作做到2008年3月份,然后我有了自己独立的课题。从事拟南芥方面的工作。我的boss很有想法,目标也明确。就是我们要研究别人已经发表过paper的基因。别人做的工作都是其中一个点,并不全面,我们要补别人的“漏洞”。再结合自身优势--我们有大量的marker lines,可以做很多的杂交,从遗传角度直接有效的揭示出其基因功能。有了这个整体规划后,我怀着做一名科学家的“梦想”开始了自己的工作。科学家啊,从第一天上学开始,科学家就等同于“爱迪生,爱因斯坦,牛顿”,这些是多么耳熟能详的名字,又是多么伟大的人。他们是天上的星星,我无数次仰望。我不奢望像他们一样,因为我没有talent,我只希望自己勤能补”拙“,换来一点点的名望,让自己成为一个“小家”的同时,也能养家糊口。不得不说,我是很务实的,对自己的规划很到位。

 

于是,第一步,鉴定突变体基因型,共分离检测。第二步,观察突变体表型。第三步,做杂交。杂交,杂交,杂交,杂交是一条不归路。拟南芥的花很小,雄蕊雌蕊很不好剥离。一开始在显微镜下操作,后来在放大镜下操作,现在我直接在肉眼下操作。杂交现在于我是最简单的工作,顺手一朵花,后代就是杂合体。我做了大量的杂交,然后找纯合体。这个看似简单的过程我用了好几年的时间来完成。原因如下:新手,没有经验,不知道从表型上可以鉴别纯合体,只知道不停的抽提DNA,做PCR。新手,杂交前没有鉴定marker lines是否纯合。新手,知识上存在缺陷。总之,简单的工作做得不出色。

 

做完杂交后,本应该按照我们的规划有很好的结果。是的,有很多的结果。但是,发不了文章。想必,内行人都知道这个道理。结果多不代表结果好。文章是要讲一个完整故事的。我做的结果写不成一篇paper。于是,找切入点。这期间我构建了系列载体,转化拟南芥。得到了启动子,蛋白,超表达等转基因材料。观察其表达模式,用各种激素,药物处理,观察表型。

 

以上的这些都是做植物研究的常规套路,我都做了一遍。各种显微镜也用过了一遍,也花了不少钱。时至今日,我依然没有文章,因此按照学校要求,我也不能毕业。

 

于是,我仍然需要努力。我还在做实验,根据已有的结果,找上下游基因,做蛋白互作。

 

写下这篇博文,只是为了给自己鼓劲。路很辛苦,希望自己的付出有所回报。

 

就此停笔,因为我要去做转化了,内行都知道,拟南芥转化的过程是转化1--3次,我这是第二次。农杆菌摇好了。

 



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