Erastin 和 RSL3 是两种经典的铁死亡小分子诱导剂，它们在表达致癌 HRASV12 的工程人类肿瘤细胞中比在表达野生型 HRAS 的同基因细胞中以较低剂量致死。鉴于致癌 RAS 突变体通过 RAS-RAF-MEK-MAPK 途径增加了成纤维细胞中的基础 ROS 水平，我们分析了 erastin 和 RSL3 在具有 BRAFV600E 突变 A375 和 G-361 的两种人类黑色素瘤细胞系中的铁死亡诱导活性。凋亡抑制剂ZVAD-FMK和坏死性凋亡抑制剂necrosulfonamide对erastin和RSL3诱导的细胞死亡都没有影响。Erastin和RSL3可以充分诱导携带BRAFV600E突变的黑色素瘤细胞的铁死亡。

为了发现调节铁死亡的 miRNA，我们在转染了 miRNA 过表达构建体的黑色素瘤细胞中进行了无偏筛选。在erastin和RSL3处理后，通过CCK-8细胞活力测定分析细胞死亡。阻断erastin和RSL3诱导的铁死亡的miRNA之一被鉴定为miR-137。与用空载体转染的细胞相比，表达miR-137的细胞的细胞活力显着增加，表明miR-137可能是铁死亡的负调节剂。化学工程化的寡核苷酸，称为“antagomirs”，是内源性 miRNA 的有效和特异性沉默剂。为了进一步证实 miR-137 在铁死亡中的作用，我们通过用 miR-137 特异性 antagomir 转染细胞来敲低 miR-137。抑制miR-137表达增加了A375和G-361细胞中erastin和RSL3诱导的细胞死亡。 miR-137 的细胞水平受到 miR-137 过表达构建体和抗 miR-137 寡核苷酸的显着调节。这些发现表明 miR-137 是黑色素瘤细胞中铁死亡的重要调节因子。