1，  磨样：将冻好的菌丝加入液氮进行研磨，将研磨的样品加入1.5mL的离心管中（预冻）。

2，  裂解：向离心管中加入1 mL裂解buffer（20mM Tris-HCL, pH7.5, 20mM KCl, 2mM MgCl2, 25% Glycerol, 250 mM sucrose, 50 mM DTT）。裂解完后用一层microcloth过滤，除去cell debris,转移至新的1.5 mL离心管中。

3，  分离：第一步用1500gcf离心10分钟，四度，第二步用10000gcf离心10分钟，上清即为细胞质蛋白。

4，  第二步离心后的沉淀用1mL细胞核重悬buffer NRB1（20mM Tris-HCL, pH7.5,25mM MgCl2,25% glycerol， 0.2% Triton X-100）洗涤6-7次，每次15000gcf 10分钟，（洗涤过多会造成核蛋白损失，过少有细胞质蛋白的污染）。

5，  将沉淀用500 uL NRB2 （20mM Tris-HCL, pH7.5，10mM MgCl2， 250mM Sucrose 0.5% Triton X-100， 5mM B-巯基乙醇）重悬。

6，  在另一个新的离心管中加入500 uL NRB3 （20mM Tris-HCL, pH7.5， 1.7M Sucrose, 10 mM MgCl2, 0.5% Trioton X-100, 5 mM B-ME）,将NRB2重悬液轻轻加至500 ul NRB3上， 4度，16000gcf,离心45 分钟。

7，  所得沉淀用400uL裂解buffer重悬，即为核蛋白。