其实这就是人生吧！

我们发现了两个天煞的蛋白能结合在一起，而且一个会抑制另一个的活性。但具体的机制，也就是说，这两个蛋白背地里干了什么事儿导致其中一个活性丧失，我们目前还不清楚。今年，2014年，整整一年，我的工作就是围绕这个问题展开的。我们打算在体外纯化蛋白，然后做各种活性测定和单分子成像，想亲眼看看，这两个天煞蛋白是怎么互相折腾的。想想又能发一篇灌水文章，心里不免窃喜。嚯嚯霍。。

老板也是个催命鬼，我最清楚不过了。我给老板下了军令状，算上构建质粒，大概两个月时间，就能把这两个蛋白及其不同结构域都纯化出来，送出去测。结果，我算上栽在这两个天煞的蛋白上了。现在想想，也许当时应该观天象，选个吉日开始工作才是。

我们打算在这两个蛋白上加个SNAP标签，这个标签可以结合不同的染料，我想让他红他就红，想让他绿他就得绿。真是美的不得了（后来证明是想得美）。然后我就开工做克隆了！PCR！EcoR1！Xhol！InFusion！猛干了一个月，除了那个测序的女人老不来上班耽误我的美梦，其他的还很顺利嘛！结果！这些蛋白真不给面子，要么压根就不表达，要么凶神恶煞的沉淀成一坨，根本不溶解。我变了各种条件，温度，时间，诱导剂浓度。没想到，这些蛋白无比刚烈，软硬不吃。在各种酷刑和诱惑之前毫不动摇，该不表达还不表达，该一坨还一坨！

好吧！我输了！我改变了策略，不加SNAP了，也不臭美了。把原始的最朴素的质粒拿出来，准备纯化。我最信任的老朋友，第一个蛋白，就出了问题。我刚上博士的时候，做的第一个工作，就是纯化这个蛋白，每次都很给力，纯化出都是一堆一堆的。结果，问题就出在他身上。死活不表达。看着那块空白的胶，我感到了来自这个世界的深深恶意。我试了不同的温度，不同的细菌菌株，还怀疑IPTG是不是坏了，自己又新订了一些，最后我还怀疑是不是抗生素太少了，选择压太小质粒都丢了。重新配了所有的buffer，结果还是不表达。我想要是我45°仰望天空，是不是也有泪水划过。。。

骂了娘之后，我重新构建了个质粒，结果终于表达了。其实就是那个老质粒出了问题，但哪儿的问题，我现在还觉得奇怪。放着放着就坏了，真是。。。人与质粒之间最基本的信任呢？

不同结构域的质粒终于好了，蛋白也开始表达了。我想终于走上正轨了。没想到我的噩梦才刚刚开始。

首先是纯化问题。在纯化的过程中，总有降解产物，到最后只剩下一坨GST了。但也有走运的时候。不知道为什么就纯化出来了。什么条件也没变，不要问我为什么。也许有鬼神相助。下一步是要把GST从蛋白上切下去。切不是问题，问题是切下之后还好把GST从蛋白溶液里除掉。在这个溶液里，GST和溶液中的小分子谷胱甘肽如胶似漆，缠缠绵绵。我要做的是，把溶液里的还原型谷胱甘肽透析出去。之后，把蛋白溶液倒到含有谷胱甘肽的柱子上，GST又和谷胱甘肽缠绵在一起，其他蛋白就麻溜的从柱子上流下来了。我用这招做了好多次实验，没有一次失手。没想到！这次却失手了！我重复了好几次，均未果！“这就是失败的滋味么？”三国杀里赵龙死的时候总要说这句话，每次玩儿三国杀，赵龙死了，我觉得他是在说我。我中间又检测了用了几百年的透析膜，此处按下不表。后来我用脱盐柱子，“透析技术哪家强？GE Healthcare找脱盐柱！”在凝胶过滤的过程中，相当于透析了上万次。试了一次，终于成功了，谷胱甘肽被除掉了，结果我的蛋白也降解了。我了个去！不管怎么说，用脱盐柱是能把谷胱甘肽给弄掉。一步一步来。

后来，我用了我们隔壁实验室的一种强大武器，专门破碎细胞用的。我们小破实验室用超声波破碎细胞，会产生很多热。我怀疑是这热会让我的蛋白降解。我找我们实验室的技术员和我一起用隔壁实验室的武器，她哭丧的脸说：“。。。我总不能拒绝你吧。。”她说她宁可绕着我们实验楼裸奔，也不愿意去那个实验室用那个武器。因为管仪器的人非常坏，总喜欢把别人说的一无是处。不怕！我厚着脸皮也要用他们的仪器，要不然我的蛋白都降解成原子了！！！！！其实我们运气挺好的，那个坏人不在了，我们去了几次，都是个好人接待的我们。虽然不是如沐春风，但比裸奔好的多。

吊诡的是，用那个武器之后，我的表达的蛋白彻底消失了，似乎从未来过一样。其实我已经麻木了。要是这个顺顺利利的做完，我自己都不相信。总是要有点差错的嘛！我重复了三次，结果都一样，消失的无影无踪。目前为止，我还不知道是怎么回事。现在我新诱导的细菌在18度里长着。明天早上我再去做一次，看看结果如何。心塞。

转眼，一年就过去了。这就是我的2014年。